成都PCR实验室的辅料是指辅助试剂和耗材，PCR实验室容易忽视的环节，就是对试验辅料进行质检。今天就来探讨关于辅料质检的一些实操案例。

一.关于辅料质检的基本原则

辅料的质检没有统一的标准，一般由各实验室自行制定。

1.外包装：每次买来一批新试剂时，先观察外包装有无破损及生产批号、有效期、试剂批号、防伪标志、试剂运输过程有无冷藏保存等。如有异常情况及时与试剂公司联系。

2.内包装：试剂是否漏夜，真空包装是否破损，试剂是否齐全，试剂标识是否清楚，以及是否有使用说明书等。

3.新试剂、新产品有选择地进行重复性（批内n=20）、准确性（采用定值质控血清）、灵敏度（采用临界值质控血清）、线性范围、稳定性试验（采用批间试验n=20）；同时进行试剂评价、备案。

4.每批新试剂均需定标，同时测定质控血清，质控血清的测定值要在允许范围内。如有异常需排除试剂外的因素后及时与厂家联系。

3.性能、污染物等质检需要线排查原因，在做判断。

二.关于辅料质检的前提条件

1.弱阳性质控：需要准备弱阳性质控，包括标准物质、第三方质控或弱阳性样品用于进行性能质控和物质控。

2.阴性质控：需要准备确定阴性的样品或空白对照，用于进行污染物的质控。

3.重复次数n：符合统计学计算的常用的两个数字是5和20,5通常是能进行统计学分析的少的重复次数，20通常用于计算百分之95的置信区间。大家根据自己的需要选择合适的重复次数。

三.常见辅料的质检

辅料的质检要结合实际工作，需要每个实验室结合自身情况来设计和调整文中提到的参数。

1.离心管：

（1）渗漏密闭性：将n个离心管加入半量墨汁，盖好盖子后放入水中，浸泡30min，没有墨汁渗出为合格。

（2）离心密闭性：将n个离心管加入半量纯水，放入离心机，10000 rpm，30min，管盖未崩开未漏液为合格。

（3）热密闭性：将n个离心管加入半量纯水，盖好盖子称重后放入金属浴中，65℃或90℃（巴氏消毒），30min，再进行称重，离心管未变形，管盖未崩开未漏液，前后重量未变化为合格。

（4）冷密闭性：将n个离心管加入半量纯水，放入-20℃冰箱，24h，离心管未变形，管盖未崩开未漏液为合格。

（5）污染物质检：将n个离心管分别加入半量阴性纯水，盖好盖子涡旋1 min后静置5min，吸取纯水作为模板进行扩增，qPCR无扩增为合格。

（6）物质检：将n个离心管分别加入弱阳性质控物,室温静置5min，然后进行提取;RNA核酸，DNA核酸，室温静置5min，作为模板进行扩增，qPCR扩增未被打压为合格。

2.PCR管：

（1）渗漏密闭性：将n个PCR管加入半量墨汁，盖好盖子后放入水中，浸泡30min，没有墨汁渗出为合格。

（2）离心密闭性：将n个PCR管加入半量纯水，放入离心机，1000 rpm，30min，管盖未崩开未漏液为合格。

（3）热密闭性：将n个PCR管加入半量纯水，盖好盖子称重后放入PCR仪，设置一个常用的PCR程序，程序运行完毕后，再进行称重，PCR管未变形，管盖未崩开未漏液，前后重量未变化为合格。

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